泡沫灭火剂水生生物急性毒性试验方法 XF/T3021-2023
6 斑马鱼急性毒性试验程序
6.1 暴露条件
斑马鱼急性毒性试验程序暴露条件为：
——持续时间：96h；
——光照：每天12h～16h；
——温度：23℃±1℃；
——溶解氧：不小于60％空气饱和值。
6.2 试验鱼数量
设置空白对照组、重铬酸钾毒性参比组及各试验浓度组，每组至少设置2个平行样品，每个样品中加入10尾鱼。
6.3 标准稀释液的配制
用三级水由以下4种溶液制备标准稀释液：
a）氯化钙溶液：将11.76g氯化钙（CaCl2·2H2O）溶于水并稀释至1L；
b）硫酸镁溶液：将4.93g硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水并稀释至1L；
c）碳酸氢钠溶液：将2.59g碳酸氢钠（NaHCO3）溶于水并稀释至1L；
d）氯化钾溶液：将0.23g氯化钾（KCI）溶于水并稀释至1L。
将上述4种溶液各取25mL，并用三级水稀释至1L。将制备好的稀释水曝气至溶解氧浓度达到空气饱和值，并将pH稳定在7.8±0.2。
6.4 试验步骤
6.4.1 预备试验
预备试验用于确定试验浓度的大致范围。这一范围可以选取较大的浓度间隔，例如1000mg／L、100mg／L、10mg／L、1mg／L和0.1mg／L。
向6个2L烧杯中加入标准稀释液，并按照上述浓度系列加入定量的泡沫灭火剂储备溶液，其中1个烧杯中不加入灭火剂储备溶液作为空白对照。
将溶液在23℃±1℃保持恒温，向每个烧杯中加入5尾鱼开始预备试验，试验时间为24h。每天2次记录烧杯中死鱼数目，并及时将死鱼取出。
6.4.2 正式试验
从24h预备试验中全部鱼死亡的最低浓度和未死鱼的最高浓度之间，以几何级数作为间距，至少选择5个浓度作为正式试验浓度。
取若干个2L烧杯，采用静态试验方法，空白试验组仅加入2L标准稀释液，其他烧杯中分别加入不同量的泡沫灭火剂储备溶液，以得到所要求的浓度值，并用标准稀释液补充至2L。
将试验烧杯温度恒定在23℃±1℃，用尼龙小孔抄网从驯养鱼池中随机选取鱼放入试验烧杯中，每个烧杯中加入10尾鱼。所有的鱼需在30min内转移完毕，转移后清除掉各烧杯液面表层的泡沫。
试验开始后，随时观察并记录试验鱼的平衡、游动、呼吸、体色变化等中毒症状。如果试验鱼没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动，以及用玻璃棒碰触尾部后无反应，即可判断该鱼已死亡。每天记录各容器中的死鱼数目，并及时清出死鱼。记录可见的试验鱼异常情况（如平衡能力丧失，游泳能力和呼吸功能减弱，颜色变浅等）。
每天至少测定一次pH、溶解氧和温度。
6.5 数据处理
绘制试验浓度对斑马鱼的累计死亡率曲线，用Excel、SPSS等常用统计程序对曲线进行拟合。计算死亡率为50％时的泡沫灭火剂浓度值，该浓度即为灭火剂样品对斑马鱼的LC50值，并用标准方法计算95％的置信限，同时计算参比物质重铬酸钾的24hLC50值。
6.6 质量控制
斑马鱼急性毒性试验程序的质量控制要求应同时满足以下3点：
——试验结束时，空白对照组鱼死亡率不超过1尾；
——参比物重铬酸钾的24hLC50值应处于200mg／L～400mg／L之间；
——试验期间，试验溶液的溶解氧浓度不小于60％空气饱和值。
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